高通量DSF分析儀，高通量DSF(差示掃描熒光)分析儀是一種先進(jìn)的儀器，廣泛應(yīng)用于生物藥物研究、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析等領(lǐng)域。以下是對其的詳細(xì)介紹：
一、基本原理
DSF(Differential Scanning Fluorimetry)是通過在熒光定量PCR儀上緩慢加熱樣品，在加熱的過程中檢測熒光染料與結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的蛋白質(zhì)相結(jié)合的量，來評價(jià)蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的方法。它可以通過熒光染料或蛋白內(nèi)源熒光信號監(jiān)測升溫過程中蛋白構(gòu)象的變化，計(jì)算其熔解溫度Tm(折疊蛋白與去折疊蛋白相等時(shí)的溫度)。
二、主要特點(diǎn)
高通量：高通量DSF分析儀能夠在極短的時(shí)間內(nèi)獲取盡可能多的信息。例如，SUPR-DSF型號的分析儀可以在60至80分鐘內(nèi)完成384個(gè)樣品的穩(wěn)定性分析與篩選。
低成本：使用標(biāo)準(zhǔn)的384孔板，無需特殊耗材以及毛細(xì)管，一次成本僅100元左右。
寬溫度掃描范圍：具有10℃~105℃的寬溫度掃描范圍，能夠覆蓋多個(gè)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域。
高靈敏度：采用高靈敏度的CMOS檢測器，能夠準(zhǔn)確檢測熒光變化。
樣品用量少：樣品用量僅需1020μL，濃度范圍0.05mg/ml250mg/ml，適用于多個(gè)階段的穩(wěn)定性分析。
三、儀器構(gòu)成
高通量DSF分析儀主要由以下幾個(gè)部分組成：
讀板機(jī)：用于裝載384孔板，讀取樣品信息。
激發(fā)光源：通常采用LED激發(fā)波長，如280nm，輸出功率為10mW。
檢測系統(tǒng)：包括光譜儀和檢測系統(tǒng)，用于檢測熒光信號。光譜儀的波長范圍通常為310nm~420nm。
數(shù)據(jù)處理軟件：用于繪制熒光強(qiáng)度隨溫度的變化曲線，通過擬合波爾茲曼方程計(jì)算出蛋白樣品的Tm值及相關(guān)參數(shù)。
四、操作流程
高通量DSF分析儀的操作流程通常包括以下幾個(gè)步驟：
樣品準(zhǔn)備：將蛋白樣品和熒光染料混合后，加入到384孔板中。
設(shè)置參數(shù)：設(shè)置儀器的升溫速率、溫度范圍等參數(shù)。
開始檢測：將384孔板放入儀器中，開始檢測熒光信號。
數(shù)據(jù)分析：使用數(shù)據(jù)處理軟件對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，得出蛋白樣品的Tm值及相關(guān)參數(shù)。
五、應(yīng)用領(lǐng)域
高通量DSF分析儀在多個(gè)領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，包括但不限于：
蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析：評估蛋白質(zhì)在不同條件下的穩(wěn)定性，如溫度、pH值、離子強(qiáng)度等。
藥物篩選：通過高通量篩選技術(shù)，快速篩選出與靶蛋白結(jié)合的候選藥物。
蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究：研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化，為蛋白質(zhì)結(jié)晶等研究提供有力支持。
小分子化合物抑制機(jī)制研究：用于小分子化合物抑制劑的篩選及其藥理機(jī)制的研究。
六、儀器維護(hù)與保養(yǎng)
為了確保高通量DSF分析儀的正常運(yùn)行和延長使用壽命，需要進(jìn)行定期的維護(hù)和保養(yǎng)。這包括清潔儀器表面、檢查光源和檢測系統(tǒng)的工作狀態(tài)、校準(zhǔn)儀器等。此外，還需要注意樣品的處理和存儲條件，避免樣品污染和變質(zhì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
綜上所述，高通量DSF分析儀是一種功能強(qiáng)大、操作簡便的儀器，在生物藥物研究和蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
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