高通量DSF快速分析熱穩定性Tm方法在單抗NISTab中的應用

　　NISTmAb是一種廣泛表征的單克隆抗體，旨在用作開發**蛋白表征新技術中的標樣。在本應用文獻中，我們使用SUPR-DSF來獲取NISTmAb的差示掃描熒光法DSE)的教話，開洛結果與壽示掃描量熱法DSO進行比較。SUPR-DSE解折了NISTAb所有的二個結構域：CH2(690C.CH3(830()和高解特汽度的FAB結構域(94oC)[1]。此外，所測得的Tm值與文獻的報道一致。這些結果證明了，應用SUPR-DSF可以輕松獲得高質量的蛋白質穩定性信息。
 

　　結論：
 

　　Protein Stable公司的SUPR-DSF可以通過檢測蛋白質內源熒光的峰位移，并快速準確地測量解鏈溫度。結果表明SUPR-DSF能夠獲得準確的解鏈溫度，包括像Fab結構域這樣的超高解鏈溫度(94 0C)。這也驗證了基于內源熒光法的SUPR-DSF可以獲得與DSC一致的結果。利用384孔板進行測試的優勢在于提高了通量，增加了便利性同時降低了樣品的消耗。
 

　　方法：
 

　　濃度為1mg/ml的NISTmAb在pH6的L-組氨酸緩中液中進行配制，分別加到384孔LPCR微孔板中，每個孔用量是104L。分裝后，將微孔板離心60秒后，用透明膠膜密封。將SUPR-DSF中的連續升混程序設置成以每分鐘10C的升溫速率測量150C到105oC的熒光光道，熒光光譜所獲得的數據，通過BCM方法進行計算處理，并量化光譜偏移。BCM的數據會處理成溫度的函數，并轉換成一階導數再進行分析。根據導數的峰值計算解鏈溫度。所有樣品的方法和結果均可獲取。